沙门氏菌活菌检测试剂盒

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  • 奶粉、乳制品中沙门氏菌的活菌检测,6cfu/25g(ml),40次/盒
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  沙门氏菌(Salmonella)是最常见的食源性细菌病原体,沙门氏菌主要污染肉类食品,家禽、蛋类、乳类及其制品也可受沙门氏菌污染。本公司自主研制的沙门氏菌活菌荧光PCR检测试剂盒能快速检测出此类食品中存在的沙门氏菌菌属,且相比DNA-PCR的检测方法,本检测方法可以区分死菌和活菌,因此不需要进行再次验证。 本试剂盒采用实时荧光RT-PCR技术,针对沙门氏菌基因的核酸序列设计特异性引物和探针,通过实时荧光PCR反应对食品中的沙门氏菌进行定性检测,适用于牛奶、果汁、肉制品中沙门氏菌的定性检测。

产品规格 

40/

主要成分 

成分

规格

PCR反应预混液

900ul×1

阳性对照

50ul×1

阴性对照

50ul×1

保存条件 

本试剂盒保存于-20,有效期12 个月。

检测步骤     

1.样本处理

25ml(g)样品,加入225ml的培养基,均质后于 37度增菌培养约15h

2.样本RNA提取

1ml增菌液,采用商品化的细菌RNA提取试剂盒,按照试剂盒说明提取样本 RNA。采用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA 待用。

3.试剂准备

冰上解冻反应试剂,反应液保持避光,解冻后将反应液混匀并简短离心,按每管15ul的量分装至PCR管中。

4.PCR加样

每管中加入cDNA样本10ul,盖好管盖,简短离心,同时做阳性对照,阴性对照和空白对照(以水代替样本 cDNA)。

5.PCR扩增

将加好的样品放置在PCR仪中,荧光通道选择FAM PCR反应参数见表,使用不同的PCR仪,反应参数可适当调整。

温度

时间

循环数

是否收集荧光

37

5min

1个循环

95

3min

1个循环

94

5s

40个循环

60

40s

6.结果分析

基线和阈值的设置:基线范围设置在3-15个循环,阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。

质量控制:阳性对照CT30S 型扩增曲线;阴性对照无CT值,扩增曲线为直线;空白对照无CT值,扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常,需重做实验。

结果判定      

1.检测样品无CT值,曲线为直线或无S 型扩增曲线,判定结果为阴性。

2.检测样品CT35,出现S型扩增曲线,判定结果为阳性。

3.检测样品35CT40并有S型扩增曲线,需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测,再次检测结果CT值仍处于3540之间,并且有S型扩增曲线,判定结果为阳性,否则判定为阴性。

最低检测限 

6cfu/25g(ml)

注意事项

1.初次使用前请仔细阅读说明书,并严格按照说明书进行操作。

2.实验操作要严格分区,防止污染。

3.RNA提取时要使用无RNA酶的枪头和管子,防止RNA 降解。

4.反应液反复冻融会降低灵敏度,建议分管保存。

5.本试剂盒仅供定性筛查用。